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La maladie de Crohn, qui touche aujourd’hui près de 120 000 personnes en France, est un véritable problème de santé publique par sa chronicité et par le retentissement social qu’elle engendre chez les patients. La symptomatologie très invalidante et les complications possibles exposent les patients à un mode de vie handicapant et dégradant. Même s’il n’existe pas à l’heure actuelle de traitements médicaux capables de guérir la maladie, plusieurs stratégies thérapeutiques peuvent être envisagées. D’une part, la stratégie conventionnelle « step-up », qui est la recommandation actuelle et d’autre part, la stratégie descendante « top-down ». Cette dernière représente une nouvelle approche dans la prise en charge de la MC, par l’instauration précoce de traitements plus agressifs chez des patients à risque de maladie sévère et évolutive. L’association d’un immunosuppresseur, l’azathioprine, à un anti-TNFa, l’infliximab, dans le cadre de la stratégie « top-down » a fait l’objet de nombreuses études et l’objectif de ce travail est d’en connaitre les intérêts et les limites. Cette association, dite combothérapie, permettrait ainsi d’obtenir une meilleure efficacité thérapeutique et une meilleure rémission clinique et endoscopique. De plus, un intérêt pharmacologique serait également apporté par la combothérapie, en permettant la diminution de la formation d’anticorps dirigée contre l’anti- NFa et donc de l’immunogénicité. En ce qui concerne la tolérance de la combothérapie, celle-ci reste discutée. Cependant, compte tenu des risques infectieux et néoplasiques auxquels elle expose, il parait raisonnable de l’utiliser avec précaution, chez des patients ciblés à risque de maladie sévère et évolutive.

Dans ce travail, des time-kill curve in vitro ont été réalisées et un modèle semi-mécanistique a été développé à partir des résultats. Ensuite, une expérience PK/PD de "time-kill curve in vivo" sur un modèle de souris immunodéprimées ayant une infection pulmonaire, a été réalisée et un modèle PK a été développé à partir des données de colistinémie plasmatique. Ces deux modèles ont ensuite été combinés afin de simuler l’évolution de la densité bactérienne attendue dans l’expérience in vivo puis les simulations ont été comparées aux données réellement observées.

Les simulations sur-estimaient l’effet de la colistine et nous avons émis trois hypothèses sur les raisons de cette sur-estimation, toutes liées à particularités des infections pulmonaires.

Ce résultat nous montre que même si la modélisation mathématique des données PK/PD nous permet théoriquement de faire des extrapolations à des situations non testées expérimentalement, une certaine prudence est de mise dans l’interprétation de ces extrapolations.

Diverses études ont pu montrer que la combinaison de plusieurs thérapies ciblées, multipliant ainsi les cibles thérapeutiques, permettait d’améliorer la réponse au traitement, réduire le développement de résistances, ou encore de minimiser les effets indésirables. Ces thérapies permettent également une certaine personnalisation du traitement. Expliquant ainsi que les combinaisons de produits sont de plus en plus utilisées. Cette personnalisation du traitement devient aujourd’hui un réel enjeu.

Il est à noter qu’il s’agit d’un sujet complexe car suivant le type de produits combinés, l’état des connaissances et le statut réglementaire de chaque composant de la combinaison, le programme de développement variera.

Face à l’émergence de ces nouvelles combinaisons, la Food and Drug Administration (FDA) ne cesse d’oeuvrer à moderniser le modèle « classique » de développement des différents types de produits. Elle a mis en place un département spécifique afin de rendre l’évaluation de ces combinaisons plus efficiente. Elle publie régulièrement des recommandations afin d’aiguiller es laboratoires car ces projets possèdent des particularités sur de nombreux plans.

Nous avons étudié dans ce travail les particularités de la prise en charge des femmes de moins de 40 ans atteintes d'un cancer du sein, alors que cette maladie touche principalement leurs aînées. En effet, en 2012, on estimait que sur 48 763 femmes diagnostiquées d'un cancer du sein en France, 4.8%, soit près de 2 341 d'entre elles, avaient moins de 40 ans.

Nous nous sommes intéressés, dans un premier temps, à la prise en charge thérapeutique du cancer y compris dans le cas particulier du diagnostic pendant la grossesse. Le taux de mutations constitutionnelles est particulièrement élevé chez les femmes jeunes, ces mutations sont à l'origine d'un taux de récidives important. La mutation d'un gène de prédisposition est donc une donnée à considérer dans le choix des traitements.

Dans un second temps, nous avons étudié les besoins de ces patientes jeunes et avons relevé la nécessité d'une prise en charge globale, au-delà des traitements de la maladie. Il est en effet indispensable de tenir compte tant des facteurs psychologiques que professionnels, sans négliger la sexualité et la fertilité de chacune.

Le pharmacien d'officine est largement sollicité dans la prise en charge au long cours de patientes jeunes atteintes de cancer du sein. Son rôle de conseil fera de lui un des acteurs principaux dans l'information et si besoin, l'orientation des malades vers les spécialistes adaptés.

Dans les grands élevages d’animaux comme le porc ou le poulet, la majorité des traitements antibiotiques est distribuée dans la nourriture ou l’eau de boisson. Si des études ont déjà montré que les habitudes de boisson ou de prise de nourriture pouvaient influer sur l’exposition au traitement, aucune ne l’a fait à grande échelle et sur plus d’une journée. Dans cette étude, nous avons suivi et analysé les consommations d’eau d’environ 600 agneaux dans un élevage en concomitance avec des administrations d’antibiotiques dans l’eau de boisson. Trois antibiotiques ont été administrés, la sulfdiméthoxine, la tilmicosine et l’oxytétracycline, et à chaque période des prélèvements sanguins ont été faits. Ces données ont été utilisées pour prédire des courbes de concentrations plasmatiques individuelles et évaluer l’efficacité des traitements avec l’index pharmacodynamique AUC24/CMI et la bactérie Pasteurella multocida.

Le comportement dipsique des agneaux est variable et peu prévisible. Au contraire des porcs, ce comportement n’est pas constant et les facteurs l’influençant n’ont pas pu être identifiés. Les concentrations plasmatiques ont été prédites dans le même ordre de grandeur que les concentrations dans les prélèvements mais la corrélation avec les consommations d’eau est restée mauvaise. En prenant comme objectif un index pharmacodynamique AUC24/CMI de 100, nous avons prédit que les concentrations atteintes ne permettraient pas de protéger les agneaux contre Pasteurella multocida, et ce, quel que soit l’antibiotique testé.

Objectif : Analyser la cinétique d'apparition de résistance au cours du temps d'une souche de Pseudomonas aeruginosa in vitro en présence de différentes concentrations de ciprofloxacine ou de méropénème par mesure de bioluminescence et évaluer la restauration de la sensibilité de la bactérie en l'absence d'antibiotique. L'objectif secondaire est de déterminer les mécanismes de résistances impliquées dans la résistance de la bactérie.

Méthodes : Réalisation de deux courbes de bactéricidie consécutives in vitro à partir d'une souche de Pseudomonas aeruginosa PAO1 rendue bioluminescente par insertion de l'opéron luxCDABE en présence de différentes concentrations de ciprofloxacine et de méropénème. La quantification bactérienne se fait par mesures de bioluminescence à partir de IVIS® Lumina XR (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) aux temps 0, H2, H4, H6, H8, H12, H24, H28 et H32. Les 2èmes courbes de bactéricidie sont réalisées suivant ou non une période de culture bactérienne en l'absence de ciprofloxacine ou de méropénème (périodes de wash-out de 18h, 42 et 66h).

Résultats : En présence de ciprofloxacine et de méropénème, le Pseudomonas aeruginosa acquiert des résistances entre la 12ème et 24ème heure se traduisant par une repousse des bactéries. La seconde exposition à l'antibiotique permet l'acquisition d'une résistance de plus haut niveau. Les mécanismes de résistance font intervenir la surproduction de la pompe d'efflux MexCD-OprJ pour la ciprofloxacine et par la répression du gène OprD pour le méropénème. Une période de wash-out allant jusqu'à 66h ne permet pas de restaurer la sensibilité de la bactérie.

Conclusion : Le Pseudomonas aeruginosa est capable d'acquérir rapidement des résistances stables à la ciprofloxacine et au méropénème. Les mécanismes de résistance font intervenir des mutations sur les pompes d'efflux pour la ciprofloxacine et sur la porine OprD pour le méropénème. Les résistances se font par palier jusqu'à des hauts niveaux de résistance. La bioluminescence apparait comme un nouvel outil dans la recherche en temps réel la vitesse d'apparition et le niveau de résistances aux antibiotiques.

Le diabète est un ensemble de pathologies chroniques caractérisées par une glycémie à jeun supérieure à 1.26 g/L. Il touche de plus en plus d’individus, le nombre de personnes atteintes de diabète dans le monde est passé de 108 millions en 1980 à 422 millions en 2014.

Les insulines représentent une grande classe thérapeutique dans le traitement du diabète, notamment dans le type 1 dit insulinodépendant. Les formulations d’insulines ne cessent d’évoluer depuis les premières préparations d’origine animale, il existe désormais des insulines lentes (basales) et rapides (prandiales). Un nouveau type d’insuline rapide a été développé ces dernières années : les insulines ultra-rapides qui permettent une absorption accélérée de l’insuline pour corriger plus rapidement l’hyperglycémie post-prandiale. L’une d’entre elle a été développée par ADOCIA, une société lyonnaise de biotechnologie, en combinant l’insuline rapide Lispro avec la technologie BioChaperone® dans une même formulation, ce qui permet de modifier la pharmacocinétique de cette insuline en accélérant son absorption et en permettant une fin d’action plus précoce afin de diminuer le nombre d’hypoglycémies.

Pour comprendre les modifications pharmacocinétiques (PK) et pharmacodynamiques (PD) apportées par BioChaperone®, nous avons construit un modèle PK de l’absorption de l’insuline couplée à BioChaperone®. Les objectifs étaient d’apporter des informations sur l’absorption de la formulation mais également de poser les bases d’un futur modèle PK/PD pour simuler la réponse glycémique après une administration de la formulation autour d’un repas standard.

Cette nouvelle insuline offrirait au patient diabétique, un plus grand confort dans son traitement quotidien (meilleure prise en charge des hyperglycémies et potentielle diminution des hypoglycémies secondaires au traitement).

Les produits issus des biotechnologies posent de nouvelles questions sur les techniques de nettoyage et leur validation. La stabilité des protéines en milieu dilué les rendant extrêmement difficiles à analyser par techniques spécifiques, le développement de techniques non spécifiques est essentiel.

Cette thèse présente les généralités d’une validation de nettoyage à travers les différents types de contaminants et l’échantillonnage pour ensuite s’attarder sur les items à développer lors de la qualification d’installation, la qualification opérationnelle et la qualification de performance d’un équipement.

La validation des méthodes d’analyse est développée à travers l’analyse de prélèvements d’effluents de rinçage et d’écouvillonnages. Les paramètres à définir selon les guides internationaux doivent alors être respectés.

Dans une seconde partie, l’exemple d’une qualification sur un analyseur de Carbone Organique Total, technique non spécifique parmi les plus utilisée, est décrite.

La validation de la méthode d’analyse sur des effluents de rinçage par analyse du Carbone Organique Total sera vue à travers des exemples chiffrés.