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État des lieux de la cytométrie en flux dans le Myélome Multiple au CHU de Poitiers et développement d’un panel plasmocytaire sur le XF-1600 Sysmex®

Introduction : Le MM se caractérise par l’apparition et l’accumulation dans la MO de clones de cellules plasmocytaires malignes. A l’heure actuelle, l’immunophénotypage ce ces cellules par CMF au diagnostic permet d’affirmer la malignité du clone de par l’expression de marqueurs phénotypiques bien établis et de par la monotypie de la chaîne légère ; tandis que le NGS évalue le pronostic. Cependant à l’heure actuelle, les recommandations sur l’utilisation de la CMF dans le suivi de la MRD du MM ne sont pas établies. L’objectif de ce travail est d’effectuer un état des lieux de la robustesse de la cytométrie plasmocytaire dans le suivi de la MRD au CHU de Poitiers, ce qui m’a permis dans un second temps d’optimiser un panel d’immunophénotypage pour le diagnostic et le suivi de ces patients sur un nouvel automate de CMF Sysmex® XF-1600 à 10 couleurs.

Méthodes : Nous avons mené une étude rétrospective sur 267 patients suivi en CMF pour une MRD myélome multiple au CHU de Poitiers, prélevés entre le 01/09/2017 et le 29/02/2024, pour un total de 599 échantillons de MO. Les données cytométriques et les analyses statistiques nous ont permis d’élaborer le premier panel plasmocytaire sur l’automate Sysmex® XF-1600 en utilisant leurs anticorps tant que possible.

Résultats : La CMF possède une grande applicabilité (> 95%), une bonne spécificité avec une forte VPP et une forte VPN. Malgré une LOD à 10-4, une bonne concordance avec le NGS (LOD à 10-6) a été observée. Le principal facteur limitant de l’application de la CMF mis en évidence dans notre étude est l’hémodilution. Suite à l’analyse de ces résultats globaux, nous avons réussi à établir le premier panel plasmocytaire sur le XF-1600 en surmontant quelques contraintes : (i) suivre les recommandations des sociétés savantes en intégrant dans le panel CD38, CD138, CD45, CD19, CD56, CD117, CD28, CD27, CD81 et les chaînes légères kappa et lambda ; (ii) 11 anticorps pour seulement 10 fluorochromes, ce qui nous a amené à devoir valider le couplage du CD28 BD® avec le CD117 BD® car nous voulions designer ce panel en deux tubes composés des mêmes anticorps membranaires avec comme seule différence, l’intégration des chaînes légères en marquage intra-cytoplasmique pour le deuxième tube, ceci dans le but d’une préparation future par le préparateur automatisé PS-10 Sysmex® ; (iii) choisir un CD38 Sysmex® et un CD38 multiépitope BD® du même fluorochrome FITC.

Conclusion : La CMF a toute sa place dans le suivi de la MRD du MM de par sa disponibilité, ses bonnes performances analytiques et son coût. Son utilisation impose une stratégie de gestion de l’hémodilution. Nous sommes le premier CHU à valider un panel plasmocytaire sur le XF-1600 avec 8 anticorps Sysmex®. La mise en place de la NGF Euroflow® avec la macro-lyse, une technique standardisée, nous permettrait d’augmenter la LOD à 10-5 pour le suivi de la MRD.

Mots-clés libres : myélome multiple, immunophénotypage, cytométrie en flux, maladie résiduelle détectable, NGS, XF-1600 Sysmex®.

Rameau (langage normalisé) :
• Myélome multiple
  
• Immunophénomarquage
  
• Cytométrie de flux
  
• Maladie résiduelle