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Pré-conditionnement rénal par un inhibiteur de la déoxyhypusine synthase (DHS) chez un modèle porcin de donneur en mort encéphalique (ME)

Introduction : La transplantation rénale reste le traitement de choix de l'insuffisance rénale terminale. En France 82% des greffes rénales sont effectuées à partir de donneurs en mort encéphalique (ME). Le passage en ME a de nombreuses conséquences sur les greffons notamment par le biais du stress oxydant (SO). La démographie des donneurs évolue avec plus de donneurs à critères élargis dont les reins sont plus sensibles au stress oxydant et à l'ischémie-reperfusion. eIF5A est une protéine impliquée dans la régulation de processus cellulaire en réponse à ce SO. Une des étapes de son activation passe par l'action de la DHS, enzyme inhibée par la molécule N1-guanyl-1, 7-diaminoheptane (GC7). Sur modèles cellulaires le GC7 a des effets protecteurs contre les lésions du SO et de l'hypoxie. L'objectif de cette étude est d'évaluer un pré-conditionnement rénal par GC7 dans un modèle porcin en ME.

Matériel et méthodes : 12 porcs (Large white, 35-52 kg) ont subi une ME par inflation d'un ballonnet intracrânien. 6 porcs recevaient GC7 administré IVD 5 minutes après le passage en ME et les 6 autres porcs n'en recevaient pas. Des prélèvements étaient réalisés avant et après le passage en ME. Au terme des 4h de réanimation les reins étaient prélevés. 1 rein servait pour les analyses, le second était transplanté le lendemain. Les tissus corticaux rénaux étaient analysés par western blot sur des marqueurs du SO : la Nitrotyrosine (NT) et l'aconitase ; sur les protéines de l'apoptose : Bcl2, Bax, les caspases 9 et 3. Les espèces oxygénées réactives (ROS) étaient mesurées sur coupes histologiques par coloration CellRox. La reprise de fonction rénale était analysée grâce à la diurèse et la créatininémie. La fibrose tissulaire était évaluée par coloration rouge Sirius sur les coupes histologique à J90. La fraction excrétée de sodium était mesurée à J0 et J14. L'expression génique des molécules d'adhérences E-Selectine, MCP1, ICAM-1 et V-CAM1 était analysée par RT-PCR. Pour l'analyse statistique les variables quantitatives sont exprimées en médianes [25-75] interquartiles. Les cinétiques sont analysées par un test non paramétrique de Kruskal-Wallis et les échantillons étaient comparés 2 à 2 par un test de Mann Whitney. Le seuil de significativité retenu était de 5%.

Résultats : Dans le groupe GC7 on note une diminution des marqueurs du SO avec une diminution significative de la NT et des ROS par rapport au groupe contrôle. Par ailleurs dans le groupe GC7 on note une diminution significative des marqueurs d'apoptose (ratio Bcl-2/Bax, et caspase 9 clivée) alors qu'il n'existe pas de diminution significative de la caspase 3 clivée. Nous observons également une diminution significative de l'ARNm de E-Selectine, de VCAM-1 et ICAM-1 par rapport au groupe sans GC7. Enfin il existe dans le groupe GC7 une diminution significative de la fibrose tissulaire à J90, une meilleure reprise de fonction rénale ainsi qu'une fraction excrétée de sodium significativement inférieure entre J0 et J14.

Conclusion : Dans cette étude préliminaire, le pré conditionnement rénal par GC7 semble avoir plusieurs effets sur les différentes agressions tissulaires secondaires à la ME, avec notamment une diminution des marqueurs du stress oxydant, une diminution de l'activation de la voie intrinsèque de l'apoptose, une diminution de l'activation endothéliale, une meilleure reprise de fonction rénale, une diminution des lésions tubulaires et une diminution de la fibrose tissulaire.

Mots-clés libres : GC7, ischémie reperfusion, greffe rénale, pré-conditionnement, mort encéphalique, porcin .

Rameau (langage normalisé) :
• Rein‎ -- Transplantation
  
• Lésions d'ischémie-reperfusion -- Prévention
  
• Expérimentation animale
  
• Porc
  
• Mort cérébrale