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Optimisation de la cryoconservation de cellules nourricières pour la fabrication d'un médicament de thérapie innovante du mélanome cutané

Les mélanomes cutanés sont les cancers de la peau les plus mortels. La forte mortalité et l'augmentation de l’incidence en font un problème de santé majeur. Une approche thérapeutique prometteuse pour des stades avancés est l’immunothérapie adoptive basée sur l’utilisation de cellules T effectrices autologues appelées TIL (Tumor Infiltrating Lymphocytes). Ces TIL nécessitent d’être activés via une co-culture avec 120.106 de cellules nourricières LAZ irradiées.

L’objectif des études réalisées est de définir :

- un protocole de sevrage des cellules nourricières LAZ, pour nous alléger les contraintes de production et vis-à-vis des contrôles qualité

- les procédés de congélation idéaux pour la conservation des cellules LAZ en Master Cell Bank (MCB) et Working Cell Bank (WCB).

Grâce à la création de ces banques, nous aimerions ne décongeler que 2 ou 3 ampoules de cellules irradiées prêt à l’emploi plutôt que de décongeler des LAZ 10j avant une production de TIL, les amplifier puis les irradier à chaque production.

Ainsi des essais ont été réalisés pour déterminer le protocole de sevrage des cellules, la solution de congélation, la quantité de cellules par ampoule et le système de congélation manuel (Boite Nalgène) ou automatisé (Controlled Rate Freezer).

Nos résultats concernant le sevrage se sont montrés décevants, ne nous permettant pas d’obtenir des cellules capables de s’amplifier. Nous avons donc décidé de poursuivre nos réalisations de MCB et WCB avec des cellules LAZ non sevrées en sérum. S’agissant de la cryoconservation, nos résultats nous ont conduits à sélectionner la solution de congélation commerciale Cryostor CS10 pour effectuer la MCB et WCB. L’absence de différence significative entre les différents systèmes de congélation testés nous ont permis de faire le choix du système manuel en Boite Nalgène. L’étude réalisée pour déterminer la quantité de cellules à ensemencer par ampoule nous amène à conclure que la congélation de 100.106 de cellules LAZ irradiées par ampoule est optimale.

Nos études ont servi à l’élaboration des procédés de fabrication des MCB et WCB de cellules LAZ et d’atteindre nos exigences. Les banques MCB et WCB peuvent donc être effectuées au sein des laboratoires conformes aux BPF.

Mots-clés libres : Mélanome, Cryoconservation, LAZ, Master Cell Bank, Working Cell Bank.

Rameau (langage normalisé) :
• Mélanome
  
• Cryoconservation